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Problemas da biossíntese de RNA em eucariotos. O modelo gl ...
Armelin, Hugo Aguirre
Problemas da biossíntese de RNA em eucariotos. O modelo glândulas salivares de Rhynchosciara angelae
Classifique: 
Autor: Armelin, Hugo Aguirre
Acervo: (us) Universidade de São Paulo
Categoria: Doutorado
Resumo: a. Do ponto de vista metodológico dois problemas foram enfrentados neste trabalho: i) extração dos RNA´s e ii) fracionamento das células das glândulas salivares de R. angelae. i) O processo prático elaborado para resolver o primeiro problema se constituiu numa variação da técnica clássica de extração com fenol. Jogando com a presença de detergente e variações de pH e de temperatura, foi possível se chegar a um método que garante a extração e um fracionamento parcial de, praticamente, todo RNA celular. Com extrações a baixa temperatura obtém-se preferencialmente rRNA e tRNA. O RNA refratário a extração com fenol a frio tem propriedades do RNA nuclear, mas o citoplasma, também parece conter classes de RNA somente extraíveis a quente. A dificuldade de extração do RNA nuclear com fenol frio, foi especulativamente interpretada como uma propriedade das RNP´s que encerram esta classe de RNA. A grande vantagem deste método de extração está no fato de ter permitido isolar, com as extrações a alta temperatura, frações de RNA enriquecidas em produtos de transcrição específicos de determinados períodos do desenvolvimento larval. ii) O fracionamento celular das glândulas salivares não é alcançado pela aplicação das técnicas tradicionais de fracionamento de tecido. Em vista disso foi necessário procurar uma alternativa experimental para êste caso. Combinando um enzima proteolítico com a ação de detergentes não iônicos foi conseguido um método útil para o fracionamento das células das glândulas salivares. Êste método foi aplicado nesta tese para um estudo inicial das RNP´s e da transferência do rRNA do núcleo para o citoplasma nas células das glândulas salivares. b. Foi possível verificar com êste trabalho que o rRNA é sintetizado inicialmente na forma de um precursor primário de 37s, o qual é processado no interior do núcleo para dar as espécies maduras de rRNA segundo o esquema: (Ver no arquivo) No 3º. período do 4º. estádio do desenvolvimento larval de
Controle do crescimento celular em mamíferos. Células em c ...
Armelin, Hugo Aguirre
Controle do crescimento celular em mamíferos. Células em cultura como modelo experimental
Classifique:
Autor: Armelin, Hugo Aguirre
Acervo: (us) Universidade de São Paulo
Categoria: Teses e Dissertações
Resumo: A finalidade básica deste trabalho foi o estudo do controle de crescimento e divisão celular em organismos superiores, utilizando células de mamífero em cultura como modelo experimental. Como os fundamentos conceituais para este tipo de trabalho não tinham, ainda, sido estabelecidos, foi feito um esforço para criar bases doutrinárias sólidas que, adequadamente, fundamentassem este tipo de investigação. Do ponto de vista teórico, alguns conceitos preliminares foram sugeridos. os pontos principais sendo: i) o estabelecimento de linhagens de células em cultura envolve a seleção clonal de células capazes de crescer nas condições de cultura. o crescimento depende dos mecanismos regulatórios do crescimento, os quais controlam o crescimento da célula quando acionados pelos reguladores extracelulares do crescimento. os mecanismos regulatórios e os reguladores são de existência postulada. a seleção de células que exibem os mecanismos regulatórios e que respondem aos reguladores deve ser atacada empiricamente, mas alguns princípios racionais podem ser adiantados a priori. ii) um modelo probabilístico de ciclo celular foi sugerido. os reguladores de crescimento foram definidos no contexto deste modelo. os mecanismos regulatórios de crescimento são hipoteticamente colocados entre as reações iniciais de Gl. uma conduta para iniciar o teste experimental das hipóteses propostas foi estabelecida. Do ponto de vista experimental, dois problemas foram estudados: i) estabelecimento de linhagens clonadas de células mamárias, a partir de um carcinoma transplantável de ratos AxC, o qual era dependente de estrógeno para crescer em animais. as limitações práticas do processo de estabelecimento de linhagens foram estudadas e exemplificadas experimentalmente. linhagens clonadas de células foram estabelecidas, as quais necessitam glucocorticoides, em concentrações fisiológicas, para crescer em cultura. os efeitos de cAMP e cGMP sobre o crescimento das células clonada
